培養基常用的滅菌方法

2022-07-05 17:33:17

培養基常用的滅菌方法

   培養基是適于細菌生長繁殖需要的各種營養物質人工配制而成的基質。按營養成分和用途不同，分為基礎、合成、營養、鑒別、選擇和厭氧培養基。按物理形態分為固體、半固體和液體三類。根據細菌的種類和培養目的不同，可采用不同的培養基。

1、滅菌方法

    培養基的滅菌方法主要有兩種，濕熱滅菌及0.22μm微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比，高壓蒸汽滅菌的工作強度小，成本較低但易造成營養成分的流失，而且在多次加樣（無菌谷氨酰胺溶液，無菌碳酸氫鈉溶液等）過程中容易造成二次污染。大多數培養基采用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾除菌，并且已成為培養基除菌的發展方向，它可低限度地減少培養基的營養損失。

1.1 濕熱滅菌
    蒸汽在冷凝時釋放出大量潛能，并且蒸汽具有強大穿透力，蒸汽的濕熱破壞菌體蛋白質和核酸的化學鍵使酶失活，微生物因代謝障礙而死亡。濕熱滅菌的效果取決于致死溫度和致死時間。致死溫度是殺滅微生物的極限溫度。致死時間是在致死溫度下殺滅全部微生物所需時間。
    高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養基、接種器械和蒸餾水的滅菌。滅菌時一般是在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設備的驗證很關鍵。

1.2 過濾滅菌
   可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為聚醚砜（PES）膜、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、聚四氟乙烯（PTFE）膜、醋酸纖維素、硝酸纖維素等等。一般采用正壓過濾，正壓過濾較之負壓過濾具有高流速、過濾快、不易污染，可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。

   目前大多數實驗室和制藥企業采用微孔濾膜、一體式過濾器（囊式過濾器）或筒式濾芯除菌。微孔濾膜需配套不銹鋼夾具，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。筒式濾芯亦需配套不銹鋼濾殼。如果是少量過濾(<200ml)可選配針頭過濾器。